分光光度计使用方法及测量原理介绍（精心总结整理版）

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2012-3-18 10:17 上传

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原理：

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    分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光吸收的效应，物质对光的吸收是具有选择性的，各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理---比耳定律。

可见光分光光度计，其波长范围为360 nm～800 nm或360 nm～1000 nm，具有测量被测溶液透光率（T）值，吸光度(A），浓度直读，模拟信号输出等功能。分光光度技术主要是利用物质特有的吸收光谱来鉴定物质性质及含量的技术，其理论依据是Lambert和Beer定律。

使用方法：

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721分光光度计的放大器暗盒及单色器箱处放有两个硅胶筒，检测室内放硅胶袋，应经常检查，发现硅胶变色（由蓝色变成粉红色），应更换新硅胶或烘干再用。仪器较长时间不使用，应定期通电、预热。仪器用完之后，须拔去电源，套上仪器罩。

操作中不做测定时，应将比色槽暗箱盖打开，以防光电管长时间受辐射，导致光电管疲劳、寿命减短。

（1）分光光度计的正确预热方法[1]

① 严格遵循各类型号仪器使用说明书，按要求在仪器接通电源前，对电源线、接地线予以检查；仪器的各个旋钮起始位置应正确（选择开关置于T，灵敏度旋钮置于1）。然后开启电源。

② 打开比色池暗箱盖(此时光栏闸门关闭，光路自动关闭)，选择所需波长和灵敏度档位，将去离子水适量注入所用比色池内，此为参比，调节“0％T”投射比旋钮，使电表指针置“T=0”。盖上比色池间暗盖，使光栏闸门打开，光敏元件受给定波长光的照射，调节“100％T”旋钮，使电表指针置“T=100％”或上限位置,预热20min,或按说明书预热一定的时间。

（注：对于带黑体的部分仪器，如721-P，此步骤应为：打开比色池暗箱盖，放入黑体和参比溶液比色皿，首先将黑体置入光路，调节“0％T”投射比旋钮，使电表指针置“T=0”；然后将参比溶液比色皿置入光路，调节“100％”投射比旋钮，使电表指针置“T=100”；预热20 min,或按说明书预热一定的时间。）

（以下这种预热方法是错误的：仪器预热。打开样品室盖（光门自动关闭）。开启电源，指示灯亮，仪器预热20 min。选择开关置于“T”旋钮，使数字显示为“00.0”。）

（2）预热完毕后，最好再次打开暗箱盖，调整“0％T”投射比旋钮使T=0。（对于带黑体的部分仪器，如721-P，将黑体置入光路，调节“0％T”投射比旋钮，使电表指针置“T=0”）

（3）将装有参比溶液和待测溶液的比色皿放置比色架中（注意：手持比色皿的毛玻璃面；装样量为比色皿高度的3/4左右；用滤纸吸干比色皿外部的溶液，用镜头纸擦拭透光面；之后检查比色皿光面干净无痕迹即可；比色皿放入时比色皿的箭头方向应与光路照射方向一致。比色皿使用前用待装溶液冲洗）。令参比溶液置于光路。

（4）盖上样品室盖，调节透光率“100％T”旋钮，使数字显示为“100.0T”（如显示不到100％T，则可加按一次）。然后将选择开关转换至A调零旋钮，数字显示应为“.000”；如不到“.000”，可按下“100％T”旋钮调整。

（5）吸光度A的测量：拉出拉杆，使被测溶液置入光路，数字显示值即为试样的吸光度A。

（6）测定完毕后，先打开样品室盖，再断电源。比色杯应清洗干净后，再贮放保存。

其他功能：

（1）浓度直读： 按MODE键，使CONC指示灯亮，将已标定浓度的溶液移入光路，按下溶液调节键（↑100％T键的↓0％键），使数字显示为标定值，将被测溶液移入光路，即读出相应浓度值。

（2）仪器数字显示背后，装有接线柱，按下FUNC键，可输出模拟信号

说明：

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1. 透射比(亦称透射率)与吸光度

透射光强度(It)与入射光强度(I0)之比称为透射比(亦称透射率)，用T (transmittance [træns'mitəns])表示，则有：

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图 1

溶液的T越大，表明它对光的吸收越弱；反之，T越小，表明它对光的吸收越强。为了更明确地表明溶液的吸光强弱与表达物理量的相应关系，常用吸光度(A，absorbance [əb'sɔ：bəns])表示物质对光的吸收程度，其定义为：

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图 2

则A值越大，表明物质对光吸收越强。T及A都是表示物质对光吸收程度的一种量度，透射比常以百分率表示，称为百分透射比，T％；吸光度A为一个无因次的量，两者可通过上式互相换算。

2. 朗伯－比耳定律的常用表达式

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图 3

液层厚度为b，浓度为c，吸光度为A

参考文献：

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[1] 董敏. 分光光度计的预热及其常见错误分析

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